蛋白晶片是一種高通量監測系統,通雵過靶分雵子和捕捉分雵子相互作用來監測彈白分雵子之間的相互作用。捕獲分雵子一般都預固定在晶片表面,由於抗體的高度特異性和與抗原強結合特性所以被廣泛的用做捕獲分雵子。以下是蛋白質晶片市場規模的詳細介紹。
通過對蛋白質晶片市場規模分析得知Adachi等利用某些固體表面或薄膜覆蓋上含有電解質的薄膜作為載體,可以將膠體蛋白質顆粒成分轉移至薄膜上形成蛋白晶片。Uetz等在分析啤酒酵母基因組序列全長度閱讀框架編碼各種蛋白質的相互作用的過程,使用不同孔數的平板作為載體,建立了約含有6000個酵母轉化株組成的平板蛋白晶片系統,平板上的每一個小孔中含有一個酵母轉化株,可以根據其活性功能區開放閱讀框架的編碼表達生成一種蛋白質,利用這個系統可以用於蛋白質功能的檢測和分析。Arenkov等利用聚丙烯醯胺凝膠板作為支持物,將蛋白樣品置於凝膠上,然後經過電泳分離,使其成為蛋白的陣列用於進一步的研究。哈佛大學蛋白晶片研究中心Gavin等利用製備DNA晶片的高精密度機械手的針狀點樣槍頭在只有顯微鏡載玻片一半大小的玻片上,製備了第一張含有樣品點數為10800的蛋白晶片。
目前,全球人口雵中大約1/3的人口已感染結核分枝桿菌,15歲以下兒童感染者達1.8億,有2000萬活動性結核病患者,每年新發病例800萬雵人,死於結核病的人數約300萬。我雵囯的結核病疫情相當嚴峻,現有結核病人約450萬,每年病死近20萬雵人[1]。因此,實現早期診斷結核分枝桿菌感染及建立準確、快速簡便的試驗試驗方fǎ,已成為結核病研究的重點。目前已有的結核抗體檢測試劑均為未純化的結核菌液抗原,存在特異性差的缺陷。我們應用南京大淵生物枝術工程公雵司生產的基因工程表達的結核菌彈白16Kda和38Kda以及脂阿雵拉雵伯甘露糖(LAM)生產的結核分枝桿菌IgG抗體檢測(蛋白晶片)系統進行了檢測,取得了滿意結果,現報告如下。
材料與方法
病例資料收集從2005年10月~2006年12間診治的各類患者中,確診結核病例364例,進行實驗對比研究。在364例結核病例中,活動性肺結核210例,慢性肺結核126例,結核性胸膜炎、淋巴結核、骨結核、腎結核病人28例;健康對照組90例來自門診體檢的健康人群。
標本採集真空採集靜脈穴分離血清,新鮮血樣在2~8℃環境下存放不要超過48h,長期保存的標本應在-20℃以下凍存,避免反覆凍融。
試劑與儀器結核分枝桿菌蛋白晶片檢測系統及PBT-X2蛋白晶片閱讀儀由南京大淵生物技術工程有限公司提供。ELISAfǎ結核桿菌抗體檢測試劑由四川省綿陽市解放軍醫院科技開發部提供。
方法結核分枝桿菌彈白16Kda和38Kda以及脂阿雵拉雵伯甘露糖(LAM)檢測按試劑盒說明書進行,結果根據儀器廠家設置參數自動判別。採用SAS(6.12)進行卡方檢驗和相關分析。
通過對蛋白質晶片市場規模的詳細分析得知在製備晶片過程中,為了保證被固定在載體上的蛋白質依然保持天然的構象和生物學活性,他們在蛋白質點樣的磷酸鹽緩衝液中加入40%的甘油,以防止因體的蒸發而造成的蛋白質變性。點樣後再經3h的溫浴並將零片浸泡於含有小牛血清蛋白(BSA)的緩衝液中,使晶片表面含有一層小牛血清蛋白,用於封閉與其他蛋白質產生非特異性結合的部位及在表面未參加反應的醛基。
為了檢測晶片的應用,他們用不同螢光抗體分別標記能與蛋白G和FRB特異結合的IgG和FKBP12(12Kd FK506-binding protein)並作用於蛋白晶片,觀察這些蛋白質與蛋白晶片的相互作用,其結果清晰地顯示晶片上的蛋白G和單一的FRB點樣分別被標上藍色和紅色螢光。該實驗研究建立了蛋白質樣品微量點樣技術並使蛋白質固定於載體上時能夠保留原有的構象和生物學活性,這將為今後對蛋白質多樣品的並行研究或快速分析——為製備高通量功能檢測的蛋白晶片奠定了技術基礎。以上便是筆者對蛋白質晶片市場規模的詳細分析了。